培養基的適用性檢查是確定培養基質量及保證實驗結果正確的前提，因此如何高效完成培養基適用性檢查成為實驗室關注的重點。那么，今天我和大家一起梳理、探討無菌檢查法中培養基適用性檢查的實驗要點及注意事項。

?

無菌檢查法測試用培養基

中國藥典2020版四部1101無菌檢查法采用硫乙醇酸鹽流體培養基(FTM）和胰酪大豆胨液體培養基（TSB）作為主要測試培養基，其中TSB替代了2010版的改良馬丁培養基，這兩種培養基在促微生物生長能力和微生物生長種群的廣泛性上無顯著性差異，但TSB在培養霉菌方面略優于改良馬丁培養基，并且TSB的pH值為7.3±0.2，相較于改良馬丁培養基的pH值6.4±0.2，TSB更適宜微生物的生長。

藥典明確了FTM和TSB這兩種培養基的適用范圍：硫乙醇酸鹽流體培養基是厭氧菌檢查的首選培養基，同時也可用于需氧菌檢查；胰酪大豆胨液體培養基適用于真菌和需氧菌檢查。即產品中可能存在的需氧菌無論被接種到哪種培養基中都能被檢出。

兩種培養基的成分與作用見下圖：

培養基的適用性檢查

1101無菌檢查法所用培養基適用性檢查包括無菌性檢查與靈敏度檢查。

? ? ? ?

? ? ? ?1、無菌性檢查

標準規定：每批培養基一般隨機取不少于5支（瓶），放置在每種培養基規定的溫度下培養14天，應無菌生長。

注意：該部分實驗意義在于證明測試所用培養基的無菌性，若無菌檢查測試中有菌檢出，考慮菌來源于他處。如果培養14天后仍然不能從外觀上判斷有無微生物生長，可取至少1mL該培養液轉種至同種新鮮的培養基中，再培養4天觀察結果。

?

? ? ? ?2、靈敏度檢查

1）菌種

培養基靈敏度檢查所用的菌株傳代次數不得超過5代(從菌種保存中心獲得的干燥菌種為第0代)，并采用適宜的菌種保藏技術進行保存和確認，以保證試驗菌株的生物學特性。

注意：在9203藥品微生物實驗室質量管理指導原則中對于菌種的要求“必要時，實驗室應對工作菌株的特性和純度進行確認”，在做確認時，可以是劃線平板觀察菌落形態，也可以做革蘭氏染色、生化鑒定等。

2）培養基接種

取適宜裝量的FTM 7支，分別接種不大于100CFU的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌各2支，另1支不接種作為空白對照；取適宜裝量的TSB 7支，分別接種不大于100CFU的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接種作為空白對照。接種細菌的培養管培養時間不超過3天，接種真菌的培養管培養時間不得超過5天。

注意：該部分實驗意義在于證明所用培養基的靈敏度足以檢出產品中可能污染的微生物。2020版藥典中對于培養基的裝量沒有強制要求，可以參照前一版藥典中的裝量要求進行配制，即FTM每管裝量為12mL/支，TSB每管裝量為9mL/支。但需要注意，FTM的裝量與容器高度的比例應符合培養結束后培養基氧化層（粉紅色）不超過培養基深度的1/2。在供試品接種前，培養基氧化層的高度不得超過培養基深度的1/3。

標準要求接種菌量不大于100CFU，測試時需同步進行涂布，對具體加菌量進行計數。

?

3）結果判定

空白對照管應無菌生長，若加菌的培養基管均生長良好，判該培養基的靈敏度檢查符合規定。

?

? ?? ?4）靈敏度檢查結果（圖示）

其他注意事項

為保證培養基的質量，實驗室對培養基的購買應有計劃，并對培養基進行外觀檢查，指標包括容器密閉性檢查、內容物的感官檢查等。培養基開瓶時應記錄首次開封日期，開封后的脫水合成培養基，其質量取決于貯存條件。通過觀察粉末的流動性、均勻性、結塊情況和色澤變化等判斷脫水培養基的質量的變化。若發現培養基受潮或物理性狀發生明顯改變則不應再使用。

?

?

參考資料：

1、中華人民共和國藥典 2020年版 四部

2、GB4789.28-2013 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 培養基和試劑的質量要求

3、中國藥典分析檢測技術指南